Mutacje bzdur w genie BCS1L jako przyczyna zespołu Björnstad cd

Kompleksy poddano elektroforezie błękitu poliakryloamidowego o niebieskim zabarwieniu, jak opisano uprzednio.9. Western bloty kompleksów białkowych sondowano przeciwciałami przeciwko BCS1L, białkom rdzeniowym i białkom R / Fe / S Rieske. Przed przeprowadzeniem analiz Western blot z użyciem przeciwciała Rieske Fe / S (Invitrogen Molecular Probes) próbki pobierano w drugim wymiarze elektroforezy w żelu poliakryloamidowym z dodecylosiarczanem sodu. Zawartość mitochondriów oceniano przez barwienie stransformowanych limfocytów za pomocą MitoTracker Green FM i hydroethidium w celu normalizacji liczby komórek (Invitrogen Molecular Probes). Transport łańcucha elektronowego
Szybkość redukcji barwnika resazuryny, który był zależny od łańcucha transportu elektronów, mierzono spektrofotometrycznie limfocytów traktowanych inhibitorem syntazy F1-ATP oligomycyną, jak opisano wcześniej18. Średnie wartości (. SE) z co najmniej trzech testów Jest zgłoszony.
Produkcja reaktywnych form tlenu
Produkcja reaktywnych form tlenu była oceniana w izolowanych mitochondriach poddanych działaniu specyficznych dla kompleksu substratów, inhibitorów i bez inhibitorów, i analizowana za pomocą wrażliwego na nadtlenek wodoru barwnika Amplex Red (Invitrogen Molecular Probes). 19 Substraty to glutaminian i jabłczan dla kompleksu I i bursztynu dla kompleksu III. Inhibitorami byli rotenon dla kompleksu I i antymycyny A z rotenonem dla kompleksu III (Sigma-Aldrich). Ponadtlenek monitorowano jako nadtlenek wodoru po dodaniu dysmutazy ponadtlenkowej (Sigma-Aldrich) do izolatów mitochondrialnych. Wartości kontrolowano dla zawartości mitochondriów i znormalizowano do liczby komórek. Podano średnie wartości z co najmniej trzech testów.
Wyniki
Sekwencjonowanie genów
Rysunek 1. Rysunek 1. Mutacje BCS1L, które powodują zespół Björnstad. W rodowodzie (panel A), recesywne dziedziczenie niedosłuchu czuciowo-nerwowego i pili torti (syndrom Björnstad) (stałe symbole) pokazuje współwystępowanie z homozygotyczną (+/-) mutacją bzdur BCS1L Arg183His (R183H). Kwadraty oznaczają mężczyzn, kobiety w kręgach, otwarte symbole, których nie dotyczą członkowie rodziny, stałe symbole dotknięte członkami rodziny, stippled symbols członkowie rodziny o nieznanym statusie klinicznym i symbole z ukośnikiem zmarłych członków rodziny; nośniki mutacji są oznaczone symbolem +. Panel B pokazuje mapę z drobną strukturą przedziału choroby zespołu Björnstad na chromosomie 2q35. Markery mikrosatelitarne zostały genotypowane pomiędzy D2S1371 i D2S163 w celu udoskonalenia krytycznego regionu zespołu Björnstad między D2S2210 a D2S2244. W panelu C homozygotyczne przejście C . T w BCS1L (gwiazdka) występuje u dotkniętego członka rodziny II-2 z rodziny BS1 (R183H / R183H) i nie występuje u zdrowej osoby (typ dziki [WT / WT]). W panelu D trawienie enzymem restrykcyjnym (frakcjonowane na 4% żelu agarozowym) produktów reakcji łańcuchowej polimerazy z odwrotną transkryptazą z RNA limfocytów potwierdza genotyp zespołu Björnstad. Homozygotyczna mutacja jest wskazana przez + / +, heterozygotyczny genotyp (nośnik) przez + / WT i normalny genotyp przez WT / WT.
Poprzednio zidentyfikowaliśmy locus genu autosomalnego recesywnego dla zespołu Björnstad1,2 na chromosomie 2q34-36.4 Dokładne odwzorowanie w spokrewnionej rodzinie z zespołem Björnstad (BS1) (Figura 1A) zawęziło krytyczny region choroby do regionu o 2 D2S2210 i D2S2244, który zawiera 47 genów (rysunek 1B)
[podobne: Mimośród, cilostazol, nutrend ]
[więcej w: stomatolog opole, wbijanie pali, designerskie wieszaki ]
[przypisy: stomatolog na nfz kraków, olx wołomin, olej z gorczycy ]