Synteza DNA i naprawy genów RRM1 i ERCC1 w raku płuc czesc 4

Jądra są niebieskie, RRM1 jest zielone, a cytoplazma guza jest czerwona. RRM1 znajduje się w jądrze i wyświetla ziarnisty wzór. Próbki surowicy odpornościowej na peptydy RRM1 zostały wygenerowane i oznaczone jako R1AS-1 do R1AS-10. Pokazano swoistość dla białka RRM1 i stwierdzono immunoreaktywność ekstraktów jądrowych linii komórkowych raka płuc (Figura 1). Przy użyciu mikroskopii konfokalnej, barwienie RRM1 wykazało gruby układ jądrowy (Figura 2). Do analizy włączono ERCC1 i PTEN, ponieważ poprzednie dane sugerowały dodatnią korelację poziomów ekspresji wśród tych genów. ERCC1 znajdował się głównie w jądrze i miał drobny ziarnisty wzór, podczas gdy PTEN znajdował się głównie w cytoplazmie.
Korzystając z techniki AQUA, oceniliśmy ekspresję RRM1 za pomocą R1AS-6 i R1AS-10 na mikromacierzy. Ta tablica zawierała trzy egzemplarze 25 próbek różnych ludzkich tkanek, w tym 12 próbek niedrobnokomórkowego raka płuc. We wszystkich tkankach ekspresja RRM1 wykazała ziarnisty wzór jądrowy, a analiza obu próbek surowicy odpornościowej potwierdziła wyniki uzyskane w liniach komórkowych (Figura 2). Wyniki ekspresji genów mieściły się w zakresie od 20,3 do 200,5 (mediana, 114,1, średnia, 111,0) dla R1AS-6 i od 36,1 do 182,7 (mediana, 85,4, średnia, 93,5) dla R1AS-10. Ekspresja RRM1 była najwyższa w jelicie cienkim, korze nerkowej i żołądku, a najniższa w naskórku, krtani i tchawicy.
Próbki nowotworów od 44 pacjentów były dostępne do analizy białka RRM1 i RNA. W przypadku próbki antysurowowej R1AS-6 stwierdzono istotną korelację między białkiem RRM1 i jego mRNA (rho Spearmana = 0,41, P = 0,004). Te same 44 próbki analizowano również pod względem ERCC1 i PTEN i mRNA. Nie stwierdzono istotnej korelacji między ekspresją białka i mRNA dla ERCC1 (rho = 0,1, P> 0,30) lub dla PTEN (rho = 0,1, P> 0,30).
RRM1 i przeżycie po resekcji chirurgicznej
Skonstruowaliśmy mikromacierz tkankowy za pomocą potrójnych rdzeni 0,6 mm z utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie próbek pierwotnego guza. Analizę ekspresji RRM1 przez AQUA za pomocą R1AS-6 przeprowadzono na próbkach uzyskanych od 187 pacjentów, którzy przeszli całkowitą chirurgiczną resekcję na niedrobnokomórkowego raka płuca w stadium I i nie otrzymali chemioterapii ani radioterapii przed wykonaniem resekcji. Wybrano R1AS-6 zamiast R1AS-10 ze względu na jego lepszą korelację z ekspresją RNA RRM1 i jego większym dynamicznym zakresem ekspresji. Ponadto, specyficzne warunki barwienia lepiej pasowały do jednoczesnej identyfikacji jąder, cytokeratyny i RRM1. Wynik AQUA wahał się od 8,3 do 96,2 (mediana, 40,5, średnia, 43,2) dla wszystkich próbek. Mediana wartości ekspresji RRM1 została wybrana a priori, aby podzielić grupy pacjentów na grupę o wysokiej ekspresji i grupę o niskiej ekspresji.
Rycina 3. Rycina 3. Szacunki Kaplan-Meier dotyczące przeżycia bez choroby i całkowitego przeżycia wśród 187 pacjentów z całkowicie zreseparowanym, stadium I, niedrobnokomórkowym rakiem płuc, zgodnie z poziomem ekspresji RRM1. Mediana wartości ekspresji białka RRM1 (określona za pomocą punktacji R1AS-6 i AQUA) została wykorzystana do podzielenia pacjentów na grupy o wysokiej ekspresji i niskiej ekspresji.
Średni czas przeżycia wolnego od choroby dla pacjentów z nowotworami, którzy mieli niski poziom RRM1 (wynik ekspresji genu, <40,5) wynosił 54,5 miesięcy (95% przedział ufności [CI], 32,9 do 74,2) [patrz też: teosyal, Choroba Perthesa, anastrozol ] [więcej w: Follixin, propolis, lewomepromazyna ] [patrz też: amantadyna, octenidol, olx knurów ]